NH2氨基色譜柱的應用:
需要注意的是,NH2氨基色譜柱的氨丙基鍵合官能團較C18和C8柱的鍵合官能團更容易發(fā)生水解。因此,在使用時應做好其使用壽命可能較短的心理準備,特別是在反相條件下使用時。
在反相條件下使用時,需特別關注PH值的控制。PH值越低,發(fā)生水解的風險就越大;流動相中水的比例越高,同樣增加了水解的可能性。因此,在使用后以及準備長時間存放該柱時,進行必要的清洗并將氨基柱保存在純凈的有機溶劑中是很好的維護措施。
在使用NH2氨基色譜柱分析酸性物質如果汁中的糖分時,酸性物質的存在意味著質子的存在,這可能導致略帶負電荷的氨基官能團發(fā)生質子化。這樣一來,經過一段時間的使用后,某些分析物的保留特性可能會發(fā)生變化,或者表現為柱效的下降。
NH2氨基色譜柱的清潔方法
1、平時在正常狀態(tài)下使用:
首先用50倍柱體積的異丙醇進行清洗,由于異丙醇的粘度較高,需適當降低流速;接著,再用50倍的甲醇進行清洗;最后,通過異丙醇過渡回常用的正相流動相即可。
2、通常在反相條件下使用:
緩沖鹽需及時沖洗,切勿直接用純甲醇進行沖洗。這是常識,因此不需要特別說明。
用50倍的純甲醇進行沖洗;隨后,使用異丙醇進行過渡,再用二氯甲烷清洗色譜柱;最后,再用異丙醇過渡回甲醇條件。
除此之外,對于經常分析極性較強樣品(如糖類、氨基酸等)的NH2氨基色譜柱,還需要定期進行深度清潔,以去除可能吸附在柱內的雜質。深度清潔步驟如下:首先,使用50倍柱體積的5%乙酸乙酯的甲醇溶液進行清洗,這一步可以有效去除極性雜質;然后,再用50倍的純甲醇沖洗;接著,通過異丙醇過渡到二氯甲烷進行深度脫水;最后,用異丙醇再次過渡回甲醇,并至少用20倍柱體積的甲醇平衡柱子,以確保柱子狀態(tài)穩(wěn)定。
在清潔過程中,務必注意流速的控制,避免過高的流速對柱子造成損傷。同時,每次清洗后都應檢查柱壓,確保柱子的通暢性。清潔完成后,應將NH2氨基色譜柱保存在純凈的有機溶劑中,并置于陰涼干燥處,以延長其使用壽命。
總之,NH2氨基色譜柱的維護與清潔是保證其分析性能的重要環(huán)節(jié)。只有嚴格按照規(guī)定的方法進行操作和維護,才能確保柱子的穩(wěn)定性和準確性,為科研和生產提供可靠的數據支持。
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