C18色譜柱兩種pH環(huán)境的選擇方法

C18色譜柱的孔徑，改進的選擇性.吞吐量.靈敏度和鍵合能力非常適合生物分子的分離分析。適用于親水性較強的蛋白質(zhì)分離。

C18色譜柱的pH環(huán)境選擇：

對于傳統(tǒng)pH使用范圍一般為2~7，因為pH值高于8時C18固定相會受到限制。由于殘留硅羥基的存在，容易對堿性化合物造成不可逆的吸附，造成峰尾，影響分離分析。pH如果值太低，鍵合烷基就會脫落，成分的分離也不能滿足要求。

1.堿性條件下C18的選擇

化學(xué)鍵合相一直是研究的熱點。

每個硅烷化分子中含有兩個硅原子，兩個硅原子之間有兩個硅原子-O-或-CH2-CH2等基團連接，每個硅原子含有一個C18官能團。其環(huán)狀結(jié)構(gòu)無論在低位都是低的pH在價值條件下，還是高的pH穩(wěn)定性高，柱效滿意。

與傳統(tǒng)的單齒化學(xué)鍵合相比，這種化學(xué)鍵合固定相的突出優(yōu)點是低.中.高pH值時穩(wěn)定性好。

在開發(fā)普魯卡因相關(guān)物質(zhì)的藥物分析方法中，對比8種色譜柱，選擇耐受性pH色譜柱大值范圍的色譜柱。分析樣品和雜質(zhì)均為堿性，使用時使用。C18使雜質(zhì)與成分之間的分離更好。如果堿性物質(zhì)之間的分離效果不好，可以考慮使用上述鍵合相填料。

2.酸性條件下C18的選擇

為了改善低色譜柱pH值時的穩(wěn)定性，有人提出了空間位阻的方法。

空間位阻作用是指連接大基團，阻礙溶質(zhì)基團攻擊硅醇基，使硅氧烷再生，提高化學(xué)鍵固定抗水解能力。

其他人在側(cè)鏈中制備了異丙基或異丁基C18化學(xué)鍵合固定相。由于固定相引入了較大的側(cè)鏈基團，三維阻礙了殘留硅醇基和溶質(zhì)之間的相互作用，在低中pH這種化學(xué)鍵合固定相更適合酸性物質(zhì)的分離。

C18色譜柱采用空間位阻技術(shù)，采用單官能團硅烷，二異丁基側(cè)鏈基團較大，空間位阻關(guān)鍵硅氧烷鍵與硅膠表面相結(jié)合，避免低pH在酸性流動相條件下，水解破壞提供了良好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。StableBond色譜柱變低pH值方法開發(fā)的首選。在方法開發(fā)初期，如果選擇流動相為酸性，可以將這種色譜柱作為首選。