液相色譜柱的活化操作是常見的C以18反相分析柱為例,甲醇或乙腈等有機溶劑通常在出廠時密封。隨著時間的推移,色譜柱中的有機溶劑揮發(fā)緩慢,色譜柱中可能出現(xiàn)氣泡。因此,新購買的色譜柱在使用前通常需要激活。
下面是常見的4.6mmX150mm,5μm粒徑的C18反相分析柱為例:
1.在激活色譜柱之前,應(yīng)使用相關(guān)試劑清洗液相系統(tǒng)的流路,以確保沒有污染物殘留。切換到密封柱試劑(通常為甲醇或乙腈),更換流路中的試劑。
2.停止泵,將分析柱的進口與系統(tǒng)連接,去掉出口的堵頭,出口與系統(tǒng)不連接。將色譜柱傾斜放置,使其出口高于進口。
3.以0.1ml/min沖洗色譜柱的流速約為5分鐘,切換到0.2ml/min繼續(xù)沖洗流速。觀察色譜柱出液口,如果連續(xù)出液,停止泵,將色譜柱出液口連接到液相系統(tǒng)。
4.以0.1ml/min流速沖洗色譜柱,5分鐘內(nèi)將流速穩(wěn)定提升至0.5ml/min繼續(xù)沖洗色譜柱。
5.以0.5ml/min在沖洗色譜柱的過程中,觀察壓力和基線是否穩(wěn)定,直至沖洗總流量達到30柱體積。
6.完成活化。
對于長期未使用的類似型號色譜柱,也可參考上述步驟再次使用前進行激活。
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